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促紅細胞生成素 (EPO)檢測試劑盒簡介

更新時間:2017-11-17      瀏覽次數(shù):1452

促紅細胞生成素 (EPO)檢測試劑盒簡介

促紅細胞生成素(英文名:Erythropoietin,簡稱:EPO)是一種調控血紅細胞制造的糖蛋白質激素,骨髓中血紅細胞前驅的細胞因子。人體的促紅細胞生成素由肝臟和腎合成分泌。嬰幼兒時期主要由肝臟合成,成年后主要由腎臟合成。促紅細胞生成素因為層出不窮的禁藥事件而為公眾所知。注射人工合成的紅細胞生成激素刺激劑(ESA)可以提高運動員的成績。這種藥物與人體自身合成的促紅細胞生成素有微小的差別,比較容易被檢測出。

促紅細胞生成素 (EPO)檢測試劑盒檢測技術簡介

雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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