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大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)ELISA操作注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2023-12-01      瀏覽次數(shù):264

大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)ELISA操作注意事項(xiàng)

使用說明書

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡60分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用。樣本在使用前也要在室溫平衡60分鐘。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

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大鼠血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(VE-cadherin)ELISA操作注意事項(xiàng)


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