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基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒,明膠酶譜法注意事項

更新時間:2015-06-23      瀏覽次數(shù):2187

     基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒,明膠酶譜法注意事項

      上海信帆生物代理銷售“基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2/9活性檢測試劑盒?",咨詢!

      我們在做明膠酶譜法實驗的時候,總是會遇到很多這樣那樣的問題,那么這個基本原理是什么,我們操作過程中應(yīng)該注意哪些問題呢,上海信帆生物為您答疑。

      酶譜法的基本過程是先將樣品進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價金屬離子存在的緩沖 系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍(lán)將凝膠染色,再脫色,在 藍(lán)色背景下可出現(xiàn)白色條帶,條帶的強(qiáng)弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。
 
        復(fù)性原理:在電泳過程中,SDS與樣品中的MMPs結(jié)合(當(dāng)然是可逆性結(jié)合),破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用,而只有當(dāng)將膠置Trition中洗脫(是放在搖床上搖,30min/次,做2次或15min/次,4次。靜置于Trition中是不妥的。)時,由于SDS被Trition結(jié)合而去除,從而使MMPs恢復(fù)了活性。

操作注意事項:

1.試劑盒的操作方法同WB是一樣的

2.試劑盒的陽性對照,是選用全血做對照,具體如下操作如下:

陽性對照(可選步驟):可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與100μl 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer等體積混合,取5-15μl上樣。

3.在操作孵育的時候,建議孵育5小時

4.本試劑盒可以檢測MMP2/9活性,同時可以測定PROMMP2/9,可根據(jù)實驗需要,選取觀察。

5.本試劑盒上樣蛋白建議20ug。



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